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RNAiMAX轉染的主要途徑探討
發(fā)布時間： 2022-04-11 點擊次數(shù)： 2725次RNAiMAX轉染是指將外源分子RNA導入真核細胞的技術，它是研究基因表達調控，突變分析等的常規(guī)工具。細胞轉染可分瞬時轉染和穩(wěn)定轉染。瞬時轉染是指外源基因進入受體細胞后，存在于游離的載體上，不整合到細胞的染色體上。穩(wěn)定轉染是指DNA整合到宿主細胞的染色體中。RNAiMAX轉染的一般途徑如下：一、物理介導1.電穿孔法電穿孔靠脈沖電流在細胞膜上打孔而將核酸導入細胞內。本法需用特殊設置（電穿孔儀），把懸浮狀態(tài)的受體細胞和供體RNA共同放入皿中（或杯中），再施以高壓電脈沖，能夠促進RNA通過細胞膜而進入胞內，并可整合到細胞的RNA中，使細胞發(fā)生轉化。若轉移的RNA為帶有選擇標記基因的質粒，也可在選擇培養(yǎng)基中進行鑒定。2.顯微注射本法是借助顯微注射器直接把RNA注射入核內，使之發(fā)生整合入受體細胞基因組中的技術。本技術需要有嚴密無菌的凈化室，以免敞開操作污染，同時要能有自動拉針儀以制備顯微針，一般用手動拉針器拉制時要能使針末端有一個0.6cm長的細部，太長易折斷，針尖開口為2-3μm間，針口小于1μm更佳，針尖開口大于5μm易刺傷細胞。3.基因槍基因槍依靠攜帶了核酸的高速粒子而將核酸導入細胞內。可以將大分子導入細胞。二、化學介導1.磷酸鈣共沉淀法磷酸鈣被認為有利于促進外源RNA與靶細胞表面的結合。氯化鈣+RNA+磷酸緩沖液按一定的比例混合，形成極小的磷酸鈣-RNA復合物沉淀黏附在細胞膜表面，借助內吞作用進入細胞質。沉淀顆粒的大小和質量對于轉染的成功至關重要。2.脂質體轉染中性脂質體是利用脂質膜包裹RNA，借助脂質膜將RNA導入細胞膜內。帶正電的陽離子脂質體則不同，RNA并沒有欲先包埋在脂質體中，而是帶負電的RNA自動結合到帶正電的脂質體上，形成RNA-陽離子脂質體復合物，從而吸附到帶負電的細胞膜表面，經(jīng)過內吞被導入細胞。3.多種陽離子物質介導DEAE-葡聚糖介導的轉染，原理可能是通過內吞噬作用而使RNA轉導進入細胞核，此法只適合暫時轉染實驗。不適用與穩(wěn)定轉染，轉染時要除去血清。三、生物介導病毒介導的轉染，以病毒作為載體，通過病毒感染的方式將外源RNA導入到細胞中，其中以逆轉錄病毒及腺病毒轉染體系常用。
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